醫學免疫學/體液免疫功能的檢測

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醫學免疫學

免疫學檢測法
- 抗原或抗體的檢測
- 體液免疫功能的檢測
- 細胞免疫功能的檢測
- 分子生物學技術在免疫學診斷中的應用

臨床上一個反復發作的化膿感染，常使醫生想到患者是否有免疫缺陷病，一般原發免疫缺陷發病年齡很小，而繼發免疫缺陷病人多在30歲以上。絕大多數免疫缺陷病人多表現為體液和細胞免疫同時受損，所以應全面檢查這兩方面的功能。遺憾的是，目前應用的檢測方法的局限性，其結果常難以得出明確結論。

一、免疫球蛋白的定量檢測

1．血清免疫球蛋白的測定　血清免疫球蛋白（Ig）的測定是檢查體液免疫功能最常用的方法。由于目前還沒有發現由IgD和IgE缺陷所致疾病，所以通常檢測IgG、IgM、IgA，這三類Ig就可以代表血清Ig的水平（表20-2）。檢測發現三類Ig水平均明顯低下，就可考慮體液免疫缺陷。但在分析兒童Ig水平時，應注意Ig的水平隨年齡而變化。體液免疫功能缺陷首先考慮患者血清Ig　水平，如果所有類別Ig水平均降低，即稱為一般性聯低丙種球蛋白血癥。如果免疫球蛋白水平極度低下，或IgG、IgM、IgA,三類Ig總量低于2mg/ml則稱為嚴重低丙種球蛋白血癥或無丙種球蛋白血癥(agammaglobulinemia)。如果只一種或兩種Ig水平降低，則稱為異常丙種球蛋白血癥（dysgammaglobulinemia）。一般性低丙種球蛋白血癥多見于繼發性免疫缺陷病。無丙種球蛋白血癥常見于原發免疫缺陷病。但是常有約50%IgA缺陷病人無臨床癥狀，伴有反復感染的IgA缺陷病人常同時有IgG的缺陷。常規的定量檢測血中Ig的方法是單向免疫擴散和免疫比濁法。

表20－2　人類血清免疫球蛋白正常量

類別	變化較大時期（mg/ml）	達到成人水平與均值
IgG	1 ～5歲～10.0 4 ～8歲 8.0 ～10.0 9 ～13歲 10 ～11.0	8歲以后 12．0±2.6mg/ml (150±321IU/ml)
IgA	1 ～2歲 4 ～8歲 1～1.5 9 ～13歲 1.5～2.0	12歲以后 2．0±0.5mg/ml (140±36IU)/ml)
IgM	1 ～4歲 4 ～8歲 1.0 9 ～13歲 1.0	男性1歲女性2歲 1.1±0.3mg/ml (130±40IU)/ml)

注：IU=國際單位

2．分泌型IgA(SIgA)的測定 SIgA是粘膜抗感染的重要因素，但是粘膜抗感染還包括少量滲出的IgM和IgG，還有細胞免疫的作用。由SIgA缺陷病人常可檢測出針對牛奶或其他食物蛋白的沉淀抗體和自身抗體，說明機體對抗原蛋白質吸收異常，同時也存在免疫調節系統的功能紊亂。一般來說血清IgA缺陷病人常伴有SIgA缺陷，反之亦然。說明在機體中血清IgA和SIgA之間有某種生物相關性。最近也有報導少數SIgA缺陷病人的血清IgA水平正常，因而分別檢查血清中和分泌液中IgA水平還是有必要的。目前用免疫比濁法可較精確地測定分泌液中IgA時和IgM和IgC水平。在用單向免疫擴散和免疫比濁法定量IgA時，因抗血清是針對這兩型共有的α鏈的，故不能區分SIgA和血清來源的IgA。而應用抗分泌小體的抗體用酶免疫分析法，可區分血清IgA和分泌型IgA,并可對SIgA進行定量。

二、常見抗體的測定

檢測體液免疫功能的另一種方法是定量測定正常人體內的幾種常見的抗體水平。常見的抗體通常是指嗜異性凝集素、抗溶血素O抗體以及麻疹病毒、脊髓灰質炎病毒的抗體。

在嚴重免疫缺陷病人缺乏上述抗體，常見抗體的缺損可驗證或支持免疫蛋白測定的結果。然而對于比較復雜的免疫缺陷，由于這類抗體主要反映過去的免疫應答能力，此外這種初次應答能力持續期短，易于消退，所以對新近發生的繼發性免疫缺陷的診斷幫助不大。

三、B細胞數目及功能的檢測

原發性免疫缺陷和繼發性免疫缺陷均可導致體液免疫功能下降。原發性體液免疫功能缺陷可能由于B細胞分化障礙，細胞內合成Ig功能紊亂或由于抑制性細胞功能過強。繼發性體液免疫功能降低可能由于蛋白質大量丟失，蛋白質吸收障礙、營養不良、免疫抑制治療的副作用，病毒感染（艾滋病）等。在診斷原發性體液免疫功能缺損中可檢查B細胞的數目和功能以確定造成缺損的原因。

1．外周血B細胞數目的檢測首先進行常規的外周血白細胞總數和分類計數檢查，這些結果是評價病人免疫系統功能狀態的基本資料。由于在全血中淋巴細胞所占比例很少，而T細胞和B細胞不能藉形態學特征分類，所以外周血B細胞數檢測需先從全血分離出富含淋巴細胞的單個核細胞（peripheral bloodmononuclear cell,PBM）。再依靠B細胞表面有免疫球蛋白分子或其他特征來檢查B細胞。常用的方法是將待檢者的PBM用FITC標記的免疫抗人Ig作直接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下顯熒光的細胞為帶有表面免疫球蛋白的B細胞。正常人B細胞的約占PBM的10%。

2．外周血B細胞功能的檢測 分離受檢者血液PBM細胞，體外培養時加入B細胞刺激物如RWM（美洲商陸刺激素）或SAC（金黃色莆萄球菌來源的刺激物）后由B細胞變成Ig分泌細胞的數量。體液免疫功能缺損患者，其PBM對PWM和SACA刺激的反應降低，產生Ig分泌細胞數正常人顯著減少。在進一步檢查這種免疫缺損的原因，則應檢查是由B細胞或TH細胞缺損所致，還是由于TS細胞數量或活性增強引起的。

抗體形成細胞計數：檢查人類Ig分泌細胞是用反向溶血空斑檢測（reversed hemolytic　plaque assay）法。將待檢人的PBM、用SPA包被的SRBC（SPA-SRBC）、兔抗人Ig抗體、補體四種成分混合，灌入用兩張玻片做成的小室，密封好，放入溫箱培養1-3小時，，在此期間，作為抗人Ig抗體的免疫IgG的FC段可與SRBC表面SPA結合，當Ig分細胞分泌出游離的Ig分子時，這些人Ig分子與SRBC表面的抗人Ig抗體結合形成免疫復合物，即可活化補體，使SPA-SRBC溶解，因此在Ig分泌細胞周圍形成一個圓形的溶血區，稱為溶血空斑，每一個溶血的空斑就代表一個Ig分泌細胞。

檢查小鼠Ig分泌細胞應用的溶血空斑試驗比較簡單，即SRBC免疫注射小鼠，4天后取脾制成單個細胞懸液，加入一定量SRBC（靶細胞）混合，在補體參加下，產生抗體的細胞分泌出的Ig與SRBC（抗原）結合在補體作用下，溶血，表現肉眼可見的溶血空斑。計數空斑數代表分泌抗體的細胞數。