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無論是光電比色計還是分光亮度計，最常用的測量方法有如下兩種。

（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線計

先配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑顯色。選用合適波長的入射光（光電比色計用濾光片，分光亮度計可轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器）。測定時先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率100%，然后分別測定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸亮度。以吸亮度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖得到一條通過原點的直線，叫做標(biāo)準(zhǔn)曲線（或稱工作曲線）。

例如，測定維生素B12時，可預(yù)先繪制維生素B12的A-c標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖8-11），再用完全相同的方法和步驟測定被測溶液的吸亮度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出被測溶液的濃度或含量。

這種方法叫做標(biāo)準(zhǔn)蛐線法。標(biāo)準(zhǔn)曲線可在固定儀器和方法的條件下多次使用，適合于經(jīng)常性工作。但若儀器不同或測定方法及條件改變，測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線不同。因此在更換任何測定條件時都需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖8-11 維生素B₁₂的標(biāo)準(zhǔn)曲線

（二）直接比較計算法

若僅對個別樣品進行測定，且A-c曲線線性良好，可水作標(biāo)準(zhǔn)曲線而直接比較測定結(jié)果。

先配制一個被測物質(zhì)溶液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液，與被測溶液在相同條件下測定吸光度。根據(jù)下式可以計算。

A_標(biāo)=K_標(biāo)c_標(biāo)b_標(biāo)

A_測=K_測c_測b_測

由于使用同一波長的入射光，采用同樣的比色皿，測定同樣的物質(zhì)。所以

K_標(biāo)=K_測

b_標(biāo)=b_測

因此A_標(biāo)/A_測=c_標(biāo)/c_測

則c_測=A_測/A_標(biāo)×c_標(biāo)

比色測量儀器 | 比色分析應(yīng)用示例——鐵的含量測定

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