減色效應(yīng)
| A+醫(yī)學(xué)百科 >> 減色效應(yīng) |
hypochromic effect
目錄 |
生物化學(xué)減色效應(yīng)
在生物化學(xué)中，是指：若變性DNA復(fù)性形成雙螺旋結(jié)構(gòu)后，其260nm紫外吸收會(huì)降低,這種現(xiàn)象叫減色效應(yīng)。
生物化學(xué)減色效應(yīng)實(shí)驗(yàn)
1 引 言
研究了甲基紫與核酸分子相互作用的紫外——可見光譜，在pH7左右，核酸包括小牛胸腺DNA，熱變性DNA，酵母RNA能夠與甲基紫相互作用，甲基紫最大吸收峰在579 nm，隨著核酸的加入發(fā)生明顯的減色效應(yīng)，減色強(qiáng)度隨著核酸濃度加大而增強(qiáng)，據(jù)此建立測(cè)定核酸的新方法，該方法線性范圍寬、簡(jiǎn)便、快速。
2 實(shí)驗(yàn)部分
2.1 主要儀器和試劑 λ-17紫外——可見分光光度計(jì)(美國(guó)Pekin-Elmer公司)。核酸溶液：小牛胸腺DNA，酵母RNA(中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所)操作液濃度100 mg/L；甲基紫溶液：2×10-4 mol/L水溶液；Tris-HCl緩沖溶液：pH=7.4。試驗(yàn)用水均為二次蒸餾水。
2.2 實(shí)驗(yàn)方法 在10 mL比色管中加入0.90 mL 2×10-4 mol/L甲基紫，適量核酸溶液和1.5 mL Tris-HCl緩沖溶液，并稀釋至刻度，然后以試劑空白作參比，測(cè)定579 nm處的吸光度值。
3 結(jié)果與討論
3.1 紫外——可見光譜
甲基紫的最大吸收峰579 nm，隨著核酸的加入產(chǎn)生減色效應(yīng)，其減色強(qiáng)度與核酸濃度成正比，減色效應(yīng)最大是小牛胸腺DNA，酵母RNA最小。
3.2 最佳酸度的選擇
試驗(yàn)了不同介質(zhì)條件下體系的減色效應(yīng)影響，以1.5 mL pH 7.4 Tris-HCl緩沖溶液減色效應(yīng)最強(qiáng)，且比較穩(wěn)定。
3.3 甲基紫濃度的影響
固定核酸濃度，試驗(yàn)了不同濃度甲基紫對(duì)體系的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明2×10-4 mol/L甲基紫0.9 mL時(shí)體系減色效應(yīng)最大，且與核酸濃度具有良好的線性關(guān)系。
3.4 反應(yīng)時(shí)間的影響
在室溫條件下，體系的反應(yīng)速度很快，5 min之內(nèi)體系吸光度即可達(dá)到最大，并且在30 min之內(nèi)基本保持穩(wěn)定。
3.5 離子強(qiáng)度的影響
通過加入NaCl溶液來改變體系的離子強(qiáng)度，隨著NaCl濃度的加大，可以抑制核酸對(duì)甲基紫的減色效應(yīng)，在配制溶液或緩沖溶液的選擇時(shí)應(yīng)避免離子強(qiáng)度過大。
3.6 共存物質(zhì)的干擾
按實(shí)驗(yàn)方法在一定量核酸存在下，大多數(shù)離子對(duì)核酸的測(cè)定影響不大，其測(cè)定結(jié)果的允許誤差不超過±5%時(shí)，下列離子及有關(guān)物質(zhì)不干擾測(cè)定(括號(hào)內(nèi)的數(shù)字是核酸濃度的倍數(shù))，即Ca2＋、Ba2＋、Mg2＋、Zn2＋（＞50)，Mo（Ⅵ）、W(Ⅵ)、Fe3＋、Ti（Ⅳ）、Cu2＋、Co2＋、Cd2＋（30），F(xiàn)e2＋、As3＋（30），烏嘌呤(5)，胸腺嘧啶，嘌呤(3)對(duì)體系的測(cè)定無影響。唯有蛋白質(zhì)對(duì)測(cè)定干擾較嚴(yán)重，測(cè)定前應(yīng)預(yù)先除去蛋白質(zhì)。
3.7 線性范圍
實(shí)驗(yàn)了不同濃度DNA，熱變性DNA，RNA線性范圍及工作曲線，不同濃度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：對(duì)于小牛胸腺DNA，熱變性DNA和酵母DNA的線性范圍分別為0～5．0，0～5．0，0～10．0 mg/L。擬合的線性方程分別為A=-0.10C+0.984,A=-0.089C+0.979和A=-0.039C+0.978(A為吸光度，C為濃度)其相關(guān)系數(shù)分別為0.998，0.997和0.995。可見本方法的優(yōu)點(diǎn)是線性范圍寬，藥品廉價(jià)易得，簡(jiǎn)便、快速，有一定實(shí)用性。
3.8 樣品分析
采用本方法對(duì)含有20～30倍Fe3＋，Cu2＋、Ca2＋和Zn2＋的合成樣品中DNA，RNA進(jìn)行了分析。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)含量為1.50和2.00 mg/L的DNA，6次測(cè)定結(jié)果分別為1.52和2.08 mg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.1%和2.5%；對(duì)標(biāo)準(zhǔn)含量為4.00和5.00 mg/L的RNA，6次測(cè)定結(jié)果分別為3.92和4.91 mg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%和2.8%。
分析化學(xué)減色效應(yīng)
在分析化學(xué)中，是指：化合物結(jié)構(gòu)改變或其他原因，使吸收強(qiáng)度減弱的效應(yīng)，也稱為淡色效應(yīng)。
在分子光譜中有機(jī)化合物的特定發(fā)色團(tuán)吸收峰摩爾吸光系數(shù)降低；而且其吸收峰位置產(chǎn)生向藍(lán)位移現(xiàn)象，稱為減色效應(yīng)。它是由于化合物分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化產(chǎn)生向藍(lán)基團(tuán)所引起的這種現(xiàn)象。如在相等物質(zhì)的量的核苷酸溶液中，游離核苷酸在260nm處的吸光率較單鏈DNA高，而單鏈DNA的吸光率又比雙鏈DNA高的現(xiàn)象。這是由于多核苷酸鏈結(jié)構(gòu)中堿基自由旋轉(zhuǎn)受阻所致。通過在波長(zhǎng)260nm處記錄溶液的光密度，能夠追蹤DNA的變性作用。
光學(xué)減色效應(yīng)
光的減色效應(yīng)是指從白光或復(fù)合光中減去某種色光，而得到另一種色光的效應(yīng)。
光的減色效應(yīng)概括起來有以下規(guī)律：
1、原色（紅、綠、藍(lán)）濾光器，只允許和本濾色鏡顏色相同的色光透過，吸收其它色光。
白光是由等量的紅光、綠光、藍(lán)光混合而成的。當(dāng)白光通過紅濾鏡時(shí)，它只允許本色光透過，吸收綠光和藍(lán)光。綠濾鏡允許透過綠光，吸收紅光和藍(lán)光；藍(lán)濾鏡允許透過藍(lán)光，吸收紅光和綠光。
2、補(bǔ)色（黃、品紅、青）濾光器，也稱中間色濾光器，它允許與本濾色鏡顏色相同的色光透過，同時(shí)還允許形成這一補(bǔ)色的其它兩種原色光透過，吸收其它色光。
補(bǔ)色濾鏡中的黃濾鏡，允許黃光和紅光、綠光透過，吸收與黃光互為補(bǔ)色的藍(lán)光；品紅濾鏡可以透過品紅光和紅光、藍(lán)光，吸收綠光；青濾鏡可能透過青光和綠光、藍(lán)光，吸收紅光。
3、兩種補(bǔ)色濾鏡疊加使用，只允許形成這兩補(bǔ)色所共有的一種原色光透過，吸收其它色光。
4、兩種原色濾鏡疊加，各種色光均被吸收，或根據(jù)某一種濾色鏡的濃淡程度，透過部分色光。
5、三補(bǔ)色濾鏡疊加，各種色光相繼被吸收，最終都不能透過，而呈現(xiàn)出黑色效果。如果三補(bǔ)色顏色均較淡，疊加后三濾鏡本身呈現(xiàn)中性灰色，這時(shí)白光還能透過一部分，但強(qiáng)度明顯較弱。
從上述濾光器的透光規(guī)律可以看出，濾光器不論是裝在照相機(jī)、攝影機(jī)、攝像機(jī)的鏡頭前端或后端，它都會(huì)根據(jù)濾光器的顏色、深淺程度，對(duì)不同波長(zhǎng)的光波進(jìn)行吸收與透過。當(dāng)濾色鏡運(yùn)用于黑白攝影中，由于濾光器的顏色不同，則會(huì)改變景物在畫面中的影調(diào)、反差。如果加用的濾色鏡與景物顏色相一致，那么，拍攝后畫面中該景物的顏色就會(huì)形成較淺或明亮的影調(diào)；如果景物中的顏色與濾色鏡不一致，則該景物的顏色在拍攝后的畫面中影調(diào)變暗。當(dāng)有色濾光器運(yùn)用于彩色攝影攝像中，畫面效果會(huì)根據(jù)所加濾色鏡的顏色而形成與濾鏡顏色相一致的色調(diào)。
| 關(guān)于“減色效應(yīng)”的留言： |  訂閱討論RSS
|
|
目前暫無留言 | |
| 添加留言 | |